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在進行HPLC分析之前,如何對生物樣品進行脫蛋白處理?

更新時間:2021-08-10      點擊次數(shù):4344

        恒譜生建議各位色譜操作者在進行液相色譜分析前,關(guān)注樣品過濾的重要性,這是為什么呢?主要是為防止蛋白質(zhì)等雜質(zhì)沉積在色譜柱上,上柱前需對生物樣品進行去蛋白的預(yù)處理。這樣可以延長色譜柱壽命并減少維護成本,從而有助于提高實驗室通量。

        脫蛋白對于分析生物液體(例如血漿,血清,尿液和腦脊髓液)中的抗生素,殘留農(nóng)藥含量等也起著非常重要的影響。并且如果不將沉淀的蛋白質(zhì)從樣品中去除,會導(dǎo)致色譜柱性能下降,最終影響色譜分析結(jié)果的準確性。

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        生物樣品中去除蛋白質(zhì)的處理方法有3種:

        利用蛋白質(zhì)脫水沉淀。采用有機溶劑如乙腈、甲醇等,或中性鹽如硫酸銨、硫酸鈉等使蛋白質(zhì)脫水而沉淀。采用乙腈時,產(chǎn)生的沉淀易分離。當(dāng)用1~3倍體積的有機溶劑時,可使90%以上的蛋白質(zhì)沉淀。將血漿樣品和乙腈混合、離心后,約95%的蛋白質(zhì)會沉淀。非極性蛋白質(zhì)(例如白蛋白)則保留在液相中。如果使用保護柱除去剩余5%的蛋白質(zhì),則可以直接注射上清液。長期使用時,需要將保護柱進行更換或倒置并沖洗掉,以防止蛋白質(zhì)進入主柱。

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        恒譜生建議在色譜柱前加保護柱,可以對樣品和流動相進行過濾,能夠更長時間的維護色譜柱柱效并有效保護色譜柱,延長色譜柱的使用壽命。恒譜生色譜保護柱經(jīng)設(shè)計優(yōu)化,在各種分離條件下對色譜的影響都極低。其低死體積設(shè)計可大幅降低峰擴散和峰拖尾,從而保持分離度和分析效率。耐壓上限可達15,000 psi,經(jīng)濟高效地保護了HPLC、UHPLC色譜柱和制備柱產(chǎn)品,發(fā)揮良好性能。

        我們有多種型號的保護柱,有直連保護柱、旋轉(zhuǎn)式保護柱,有UPLC、分析保護柱和半制備、制備保護柱,它們結(jié)合了不銹鋼的強度和PEEK 預(yù)填柱芯的方便和高效。更好的滿足客戶的多種需求。

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        利用蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀。常用的為酸性沉淀劑,如三氯醋酸、高氯酸等,或用重金屬離子等使蛋白質(zhì)沉淀。 用C2HCl3O2酸化,離心并用氫氧化鈉中和可除去99%的蛋白質(zhì)。也可以使用全C2H3ClO2。

        其他方法。加熱使蛋白質(zhì)沉淀,適用于樣品對熱穩(wěn)定者。可將樣品置沸水浴中,使蛋白質(zhì)直接變性生成沉淀?;虿捎贸瑸V和透析方法,除去體液樣品中的蛋白質(zhì),在處理過程中樣品內(nèi)蛋白質(zhì)并未變性,結(jié)合的待測成分未能被解脫出來而不能檢出,此法可測得血清或血漿中游離的待測成分的濃度。但費時,在分析大量的樣品時,受到一定的限制。


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