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一、分離模式選擇色譜柱的首要任務(wù)是選擇分離模式。分離分子的方法有很多,其中應(yīng)用*泛的包括反相、正相、親水相互作用、離子交換和尺寸排阻HPLC。還有一些不太常見但更專業(yè)的分離模式,例如使用手性固定相或流動(dòng)相的特定手性色譜。反相色譜柱通常用于非極性或弱極性有機(jī)化合物,它包含非極性固定相(如C18),通常與極性流動(dòng)相配對(duì)。恒譜生C18AQ反相色譜柱在水下?lián)碛?產(chǎn)品的壽命,適于極性較大的物質(zhì)在高水相條件下的分析。但是該方法不適合應(yīng)用于蛋白質(zhì),流動(dòng)相通常含有低pH值的乙腈或甲醇,可能會(huì)...
當(dāng)保護(hù)柱或色譜柱的壓力漸升時(shí),可通過以下方法對(duì)問題配件進(jìn)行清洗再生。注意:清洗色譜柱時(shí)需要將保護(hù)柱和抑制器、電導(dǎo)池取下,連接順序是泵→六通閥→色譜柱(需要反接)→廢液管;清洗保護(hù)柱時(shí)需要將色譜柱和抑制器、電導(dǎo)池取下,連接順序是泵→六通閥→保護(hù)柱(需要反接)→廢液管親水性離子污染按以下步驟沖洗(流量0.5mL/min)1、反接柱子(保護(hù)柱或色譜柱)注意:一定要將抑制器從流路中斷開,避免損壞抑制器。2、100分鐘:10倍淋洗液濃度的溶液(起清洗作用的主要是Na2CO3)3、100...
將色譜柱保持在最佳狀態(tài)將大大有助于改進(jìn)和標(biāo)準(zhǔn)化您的分離操作,同時(shí)確保色譜柱的使用壽命。您可以采取以下措施來實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。一、注意清潔。如果您從一開始就注意并定期清潔,那么色譜柱的使用壽命會(huì)更長(zhǎng)。清潔色譜柱所需的溶劑、酸或堿的類型取決于它們的設(shè)計(jì)和吸附劑的具體類型。雖然有些色譜柱需要使用氫氧化鈉,但該溶液會(huì)損壞其他色譜柱中的吸附劑。請(qǐng)按照色譜柱的說明書進(jìn)行操作。二、儲(chǔ)存條件也很重要。很多人沒有考慮如何存儲(chǔ)液相色譜柱,細(xì)菌會(huì)在緩沖液的中性環(huán)境中成長(zhǎng)。通過水流過色譜柱來防止細(xì)菌生長(zhǎng)...
液相色譜的保護(hù)柱,顧名思義是用來過濾樣品和流動(dòng)相中的雜質(zhì),保護(hù)色譜柱,延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命的安裝位置通常在進(jìn)樣器之后,色譜柱前端。保護(hù)柱再選擇時(shí)分兩種:一種是獨(dú)立式卡套保護(hù)柱。卡套內(nèi)放有柱芯,柱芯內(nèi)含有填料,柱芯可以更換,而柱芯是根據(jù)色譜柱的類型來選擇的。另一種是一體化卡套保護(hù)柱。這是一種特殊的色譜分析柱構(gòu)造,色譜柱前端是一體化的,可以直接打開保護(hù)柱卡套。這種保護(hù)柱帶來的死體積較小,但是分析柱選擇時(shí)成本較普通分析柱更高。值得注意的地方,保護(hù)柱的柱芯除了需要根據(jù)色譜柱的類型進(jìn)行...
初次將UHPLC用于小分子分離時(shí),能得到很好的峰形,但是蛋白質(zhì)峰的分離幾乎沒有那么好,因此通常不可能顯著縮短運(yùn)行時(shí)間。然而,最近對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)一步改進(jìn)讓UHPLC可以提供更好的分離度和更短的運(yùn)行時(shí)間。雖然UHPLC不能讓科學(xué)家始終看到蛋白質(zhì)之間的所有差異,但它可以讓他們看到一些差異——例如,在大體形態(tài)、二硫化物異構(gòu)體、脫氨基作用和蛋白質(zhì)折疊方面。蛋白質(zhì)研究人員使用不同的色譜模式來實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),例如反相色譜(RPC)、離子交換色譜(IEX)和尺寸排阻(SEC)色譜。為了成功分離出蛋...
UHPLC是一種專門的液相色譜方法,與HPLC相比,它運(yùn)行速度更快、分辨率更好并且使用的溶劑更少。UHPLC通過使用填充較小顆粒(通常直徑小于2µm)的較小色譜柱來實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。生物化學(xué)、細(xì)胞和分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和許多其他領(lǐng)域的研究人員依靠UHPLC從混合物中分離不同類型的分子——無論這些分子是蛋白質(zhì)、肽、代謝物、藥物化合物還是其他化學(xué)物質(zhì)。盡管UHPLC的性能明顯更好,但它并不總是*。在您考慮改用UHPLC時(shí),恒譜生將幫助您區(qū)分重要和不重要的內(nèi)容。為什么選擇UH...