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液相色譜是世界各地實驗室使用的流行純化技術(shù)。如果系統(tǒng)設(shè)置和操作正確,它可以立即從混合物中分離出所需的化合物。學(xué)習(xí)如何使用和制備緩沖液和溶劑是能提高系統(tǒng)性能的重要技巧之一。準確制備和正確選擇緩沖液對于在液相色譜中獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。一、了解您的化合物如果您正在尋找混合物中的特定化合物,您應(yīng)該使用最能將您的分析物與其他分析物分開的緩沖液/溶劑組合。例如,了解極性和溶解度(極性或非極性)、電離、您正在尋找的紫外吸光度將有助于指導(dǎo)您使用特定的色譜柱和溶劑組。二、純度使用較低等級...
本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完mei的協(xié)議適合每一種分離目的。因此,建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測試,您將輕松純化您正在尋找的組件。一、快速液相色譜純化使用快速色譜法進行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱使用更大的粒徑和柱容量,允許使用更多的起始材料,但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度,或者如果下一步將進行HPLC,這可能是您的選擇。1、確定溶劑系統(tǒng)樣品的純度(即混合物中有多少化合物...
質(zhì)譜(MS)使研究人員能夠研究許多特性,例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強大的分析工具,能夠從復(fù)雜的生物混合物(如牛奶、血清和全脂)中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù),包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細胞裂解物。一、液相色譜與質(zhì)譜在將樣品引入MS儀器之前,通常通過過濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來制備樣品。大多數(shù)情況下,許多或所有這些步驟都是由HPLC、UPLC系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對樣品進...
分析保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度,延長分析柱使用壽命。保護柱位于進樣器與分析柱之間,作用主要兩方面:1.截留不溶性顆粒2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)以下幾種情況建議使用保護柱:1.中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析——因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重,梯度洗脫時影響更大。2.生物樣品分析——因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,保護柱可先于分析柱承受這種污染,從而延長分析柱壽命。保護柱很重要,但選擇合適的保護柱...
UHPLC是一種專門的色譜方法,與HPLC相比,它運行速度更快、分辨率更好并且使用的溶劑更少。UHPLC通過使用填充較小顆粒(通常直徑小于2µm)的較小色譜柱來實現(xiàn)這一點。生物化學(xué)、細胞和分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和許多其他領(lǐng)域的研究人員依靠UHPLC從混合物中分離不同類型的分子——無論這些分子是蛋白質(zhì)、肽、代謝物、藥物化合物還是其他化學(xué)物質(zhì)。盡管UHPLC的性能明顯更好,但它并不總是*。在您考慮改用UHPLC時,恒譜生將幫助您區(qū)分重要和不重要的內(nèi)容。一、為什么選擇UH...
制備柱具有各種尺寸,可以實現(xiàn)高分辨率分析和快速的分析。在制備色譜中,達到高純度、高回收率和高通量的分離十分重要。制備柱主要應(yīng)用在植物化學(xué)、藥物合成、生物化學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品的提取及純化工作中。不同的工作領(lǐng)域中組分的制備和純化量的差異較大。在生物技術(shù)領(lǐng)域中,酶的分離是μg級;在天然產(chǎn)物化學(xué)和合成化學(xué)領(lǐng)域中,為應(yīng)對未知成分定性鑒別、結(jié)構(gòu)測定、生物活性測試等要求,需要純化若干mg級的高純物;在藥品和醫(yī)藥學(xué)測試中,需要g級的標準品和對照品;在工業(yè)級提純中,目標產(chǎn)物工業(yè)化生產(chǎn)往往需要kg級...